牛孢疹病毒

DBS 干血斑应用特集 4: 牛孢疹病毒抗体的检测

牛鼻气管炎及其诊断

牛鼻气管炎 (bovine rhinotracheitis, IBR) 是一种牛的流行性疾病,患病会引起牛的产量下降、高额的治疗费用和贸易限制,因此会在世界范围内造成巨大的经济损失。

牛鼻气管炎

牛孢疹病毒 BoHV-1 是传染性牛鼻气管炎 (IBR) 的病原体,而 BoHV-1 抗体则是诊断牛鼻气管炎的生物标记物。对牛进行定期的 BoHV-1 抗体监测可以在病牛患病初期进行个体识别与隔离,有效地降低牛鼻气管炎在牛群中大规模传播的风险,因此对保障畜牧业收益具有重要的价值。

干血斑: 方便的血样采集

目前 BoHV-1 抗体监测采用的是酶联免疫吸附测定 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),需要由兽医抽取牛的静脉血液,离心分离出血浆,再进行检测。静脉取血的取血量大,且过程比较复杂,需要兽医具有丰富的经验。取血过程中,动物往往会出现抵触情绪,有时甚至会受到惊吓。

干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一种新型的血液采集和储存方法。它将微升级末梢血采集到样品卡上,干燥后形成斑点。该方法采样过程简单方便,饲主可自行操作;侵入性小,特别适合对小型动物 / 宠物和实验动物进行血样采集。

相比于液态血,固态的干血斑具备更好的稳定性和生物安全性,可实现样品的常温运输,更可以以更温和的条件储存样品,构建生物样本库。

简单血样采集步骤

饲主自行采样
1.饲主自行采样
2.邮寄样品
3.检测
4.诊断治疗

DBS 干血斑应用案例:
牛孢疹病毒抗体的检测

研究首次将 DBS 技术应用于 BoHV-1 抗体的检测中,从技术上证明了其应用可行性。BoHV-1 阳性和阴性的干血斑样本通过全自动干血斑萃取平台 DBS-MS 500 Hct 直接萃取收集,再进行 ELISA 测试,检测 BoHV-1 抗体。

与干血斑样品对应的血浆样本 (BoHV-1 阳性和阴性) 也采用相同的检测方式进行检测,用于对比干血斑样本与传统血浆样本的异同。另外,此项研究还探讨了干血斑的储存条件与时间对 BoHV-1 抗体检测结果的影响。

样本

9 个阳性干血斑样本、20 个阴性干血斑样本及对等数量的阳性和阴性血浆样本

检测目标

BoHV-1 抗体

卡片

Ahlstrom AutoCollectTM 

样本运输条件

室温三天、-20°C 四个月、保存四周 (含 4 个不同条件: 4°C、室温、37°C 及一小时紫外光照后室温)

提取方法

Epitope ELISA kit 缓冲液直接提取

检测方法

ELISA、IDEXX IBR gB X3 Ab Test kit

结果

干血斑样本的检测结果与传统血浆样本结果完全一致。

另外,干血斑样本在室温下保存 3 天或在 -20°C 保存 4 个月,都能得到准确的检测结果,因此其高稳定性可以允许干血斑样本的室温运输及长期保存,特别适合用于相关疾病的大规模筛查。

图 1. 牛干血斑采集和 全自动样品萃取流程图。
图 2. ELISA 抗体效价结果。

从左至右的五个条件分别为室温保存 3 天的阳性干血斑、-20°C 保存 4 个月的阳性干血斑样本、阳性血浆样本、阴性干血斑样本和阴性血浆样本。抗体效价说明: >55% 认定为阳性,<45% 认定为阴性,45% – 55% 之间为怀疑样本。

参考文献:

Lechmann, J.; Gehrig, O.; Luginbühl, M.; Fraefel, C.; Gaugler, S. Fully automated dried blood spot sample handling and extraction for BoHV-1 antibody testing by ELISA. J. Virol. Methods 2022, 310, 114626.

配合干血斑加快进行生物标记物的研究,力扬推出 CAMAG 全自动干血斑萃取系统 DBS-MS 500,从自动化方向对传统干血斑技术进行的一次全面升级,可实现全自动、快速、无人值守的干血斑样品制备,并可结合质谱、PCR、NGS 测序及 ELISA 等检测技术,应用于以下领域:

  • 健康生物标记物检测
  • 治疗药物监测
  • 基因组检测
  • 感染检测
  • 生物样本库
  • 药物的临床前试验
  • 食品安全
全自动干血斑 萃取系统
阅读量:726